摘要本文研究了小檗碱对人结肠癌细胞sw480外泌体的影响及其潜在机制。实验采用细胞计数试剂盒（CCK-8）检测细胞增殖，ELISA检测细胞外泌体中的小分子...

摘要本文研究了小檗碱对人结肠癌细胞sw480外泌体的影响及其潜在机制。实验采用细胞计数试剂盒（CCK-8）检测细胞增殖，ELISA检测细胞外泌体中的小分子RNA（miRNA）和蛋白质，实时定量PCR检测mRNA表达，Western blot检测蛋白质表达。结果表明，小檗碱可显著抑制sw480细胞的增殖，并增加细胞外泌体中miRNA和蛋白质的分泌。同时，小檗碱处理的细胞外泌体可抑制靶细胞的增殖并促进凋亡。机制研究表明，小檗碱可能通过调节细胞外泌体中的miRNA（如miR-21和let-7）及其靶基因（如PTEN和c-myc）表达来影响外泌体的功能。引言结肠癌是全球最常见的消化道恶性肿瘤之一，严重威胁着人类的健康。小檗碱是一种从中药黄连中提取的化合物，具有抗炎、抗肿瘤、抗心律失常等多种药理作用。近年来研究发现，小檗碱对结肠癌具有抑制作用，但其作用机制仍需进一步探讨。外泌体是由细胞分泌的纳米级膜泡，其中包含mRNA、miRNA、蛋白质等生物活性物质，在细胞间信息传递中发挥重要作用。研究表明，肿瘤细胞外泌体可通过传递生物活性物质影响靶细胞的增殖、凋亡和免疫应答。因此，本文旨在探讨小檗碱对人结肠癌细胞sw480外泌体的影响及其机制。材料与方法材料人结肠癌细胞sw480；小檗碱；细胞计数试剂盒（CCK-8）；ELISA试剂盒；实时定量PCR试剂盒；Western blot试剂盒；miRNA提取试剂盒。方法sw480细胞常规培养于含10%胎牛血清的RPMI-1640培养基中，加入青霉素和链霉素各100 U/ml，置于37℃、5% CO2的培养箱中培养。将细胞分为对照组和小檗碱处理组，对照组加入等体积的培养基，小檗碱处理组加入10 μM小檗碱。将sw480细胞接种于96孔板，分别加入对照组和小檗碱处理组的细胞培养液。培养24、48和72小时后，加入CCK-8试剂盒，继续培养4小时。使用酶标仪检测各孔的光密度（OD）值，计算细胞的增殖抑制率。收集对照组和小檗碱处理组的细胞上清液，采用ELISA试剂盒检测其中miRNA（包括let-7、miR-21等）和蛋白质（如PTEN、c-myc等）的含量。提取对照组和小檗碱处理组细胞的总RNA，采用实时定量PCR试剂盒检测mRNA表达。以β-actin为内参基因，采用相对定量法计算各基因的相对表达量。收集对照组和小檗碱处理组的细胞裂解液，采用Western blot试剂盒检测各组细胞的蛋白质表达。以β-actin为内参蛋白，采用相对定量法计算各蛋白的相对表达量。结果小檗碱对sw480细胞增殖的影响如表1所示，与对照组相比，不同浓度小檗碱处理后sw480细胞的增殖受到明显抑制（P<0.05），且呈浓度和时间依赖性。在10 μM浓度下，小檗碱对sw480细胞的增殖抑制率随处理时间的延长而增加。在处理72小时后，抑制率达到最高值（56.3%）。表1 小檗碱对sw480细胞增殖的影响（x¯±s, n=3） 处理时间(h) 对照组 小檗碱组(μM) | 24 | 1.00±0.05 | 0.95±0.06 | 0.91±0.07 | 0.87±0.05 | 0.79±0.06 | 0.73±0.05 | 0.68±0.04 | 0.62±0.0